Verschil tussen directe en indirecte ELISA | Direct tegen indirect ELISA

Belangrijkste Verschil - Direct tegen Indirect ELISA

Een enzym-gekoppelde immunoassay (ELISA), ook wel enzymimmunoassay genoemd, is een serologische test die antilichamen in het bloed detecteert. Het wordt gebruikt als diagnostisch hulpmiddel om uit te vinden of de patiënt blootgesteld is aan een bepaald type virus of een ander besmettelijk middel (antigeen) en of het lichaam antilichamen heeft geproduceerd tegen de infectie. ELISA kan ook de verleden en huidige infecties identificeren. Daarom wordt ELISA vaak gebruikt als een voorschriftstoets door de artsen voorafgaand aan een diepgaande analyse van ziekten. Deze test kan in het laboratorium worden uitgevoerd door een bloedmonster van de patiënt te nemen. Er zijn twee soorten ELISA-test: direct ELISA en indirect ELISA. Het belangrijkste verschil tussen directe en indirecte ELISA is dat indirecte ELISA gevoeliger is en de toevoeging van een secundair antilichaam vereist, terwijl direct ELISA minder gevoelig is en alleen een primair antilichaam gebruikt .

INHOUD

1. Overzicht en sleutelverschil

2. Wat is Direct ELISA

3. Wat is Indirect ELISA

4. Zij aan elkaar vergelijken - Direct tegen indirect ELISA

5. Samenvatting

Wat is Direct ELISA?

ELISA is een ziekte diagnostische test uitgevoerd om de aanwezigheid van bepaalde antigenen of antilichamen in het bloed te identificeren. Het is gedaan als een plaatstest. Het maakt gebruik van antilichamen gekoppeld aan gemakkelijk geanalyseerde enzymen. De aanwezigheid van antigenen in het serummonster bindt met specifieke antilichamen verbonden aan enzymen. In de laatste stap wordt een specifiek substraat toegevoegd om te reageren met het enzym. Het enzym zet het substraat om in een gekleurd of signaalproductieproduct. De kleurverandering in het chemische substraat onthult de aanwezigheid van een bepaald antilichaam in het serummonster. Directe ELISA-test gebruikt alleen een primair antilichaam dat is gekoppeld aan het enzym. Bij binding aan het antigeen verandert het snel de kleur, wat de aanwezigheid van het besmettelijke middel in het bloed aangeeft. De intensiteit van de signalen is echter zwakker in directe ELISA, omdat de epitopen beperkt zijn tot binding van de antigenen. Daarom is direct ELISA minder gevoelig in vergelijking met indirect ELISA.

Afbeelding 01: Direct ELISA Test

Wat is Indirect ELISA?

ELISA kan worden uitgevoerd met behulp van twee soorten antilichamen namelijk; primair antilichaam en secundair antilichaam Indirect ELISA tool gebruikt beide soorten antilichamen om de signalen te versterken voor een betere detectie. De indirecte ELISA techniek wordt als volgt uitgevoerd.

Platen worden geïncubeerd met antigenen en gewassen om nonspecifieke binding te blokkeren.
Dan worden primaire antilichamen toegevoegd en gewassen.
Enzyme-gekoppeld secundair antilichaam worden toegevoegd en gewassen.
Een substraat wordt toegevoegd en mag reageren met enzymen.
Signalen worden gedetecteerd en de aanwezigheid of afwezigheid van het specifieke antigeen in het monster wordt geïdentificeerd.

In indirecte ELISA-test kunnen meerdere secundaire antilichamen binden aan een enkel primair antilichaam. Secundaire antilichamen zijn gekoppeld aan gemakkelijk geanalyseerde enzymen. Daarom kan één binding een sterk signaal veroorzaken door meer dan één interactie. Daarom is indirecte ELISA gevoeliger dan direct ELISA. Echter, indirecte ELISA kan onjuiste signalen veroorzaken door kruisreacties van de secundaire antilichamen.

Figuur 02: Indirecte ELISA-test

Wat is het verschil tussen directe en indirecte ELISA?

- diff Artikel Midden voor Tabel ->

Direct tegen Indirect ELISA
Direct ELISA is minder gevoelig in vergelijking met indirect ELISA.	Indirecte ELISA is gevoeliger.
Tijd genomen
Directe ELISA-test is een snel proces.	Indirecte ELISA is tijdrovend.
Gebruik van antilichamen
Alleen één type antilichamen (primaire antilichamen) worden gebruikt in directe ELISA.	Primaire en secundaire antilichamen worden gebruikt voor indirecte ELISA.
Link met enzymen
Primaire antilichamen zijn gekoppeld aan enzymen.	Secundaire antilichamen zijn gekoppeld aan enzymen.
Kruisreactiviteit van tweede antilichamen
Directe ELISA elimineert de kruisreactiviteit van tweede antilichamen.	Indirect ELISA wordt beïnvloed door kruisreactiviteit van tweede antilichamen.
Signalen
Signalen zijn zwak in vergelijking met indirect ELISA.	Signalen worden versterkt in indirecte ELISA. Daarom is het makkelijk te detecteren.

Samenvatting - Direct tegen indirect ELISA

ELISA is een biochemische techniek die hoofdzakelijk in immunologie wordt gebruikt om de aanwezigheid van een antilichaam of een antigeen in een bloedmonster van een patiënt te detecteren. Het kan uitgevoerd worden via twee processen die bekend staan als directe of indirecte ELISA. Directe ELISA-test gebruikt alleen primaire antilichamen om het antigeen te detecteren, terwijl indirecte ELISA zowel primaire als secundaire antilichamen gebruikt. Bij directe ELISA worden primaire antilichamen gelabeld, terwijl in indirecte ELISA secundaire antilichamen worden gemerkt. Dit is het verschil tussen directe en indirecte ELISA.

Referenties

1. "De enzym-linked immunosorbent assay (ELISA). "Bulletin van de Wereldgezondheidsorganisatie. U. S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29 maart 2017

2. Loon, A. M van, J.T. Van Der Logt, F.W. Heessen en J. Van Der Veen. "Enzyme-gekoppelde immunosorbent-analyse die gebruikmaakt van geëigineerd antigen voor detectie van immunoglobuline M en A-antilichamen in toxoplasmose: vergelijking met indirecte immunofluorescentie en dubbel-sandwich-enzym-gekoppelde immunosorbentassay. "Journal of Clinical Microbiology. U. S. National Library of Medicine, juni 1983. Web. 29 maart 2017

Image Courtesy:

1. "ELISA-diagram" Door Cavitri - Eigen werk (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia

2. "Indirect ELISA" Door Cawang - Eigen werk (CC0) via Commons Wikimedia