Verschil tussen selecteerbare markering en reportergen | Selecteerbare Marker vs Reporter Gene

Belangrijkste verschil - Selecteerbare marker vs Reporter Gene

Genetische techniek wordt gebruikt om belangrijke genen van organisme naar een ander organisme over te dragen. Invoeging van een vreemd gen in het genoom van een ander organisme en het uitdrukken in de gastheercel zijn moeilijkste stappen bij het overbrengen van genen. Om het succes van het transformatieproces te detecteren worden in het recombinante molecuul een selecteerbare marker en een reportergen gebruikt. Een selecteerbare marker is een DNA sequentie of een gen dat de getransformeerde cellen uit de niet-getransformeerde cellen expressieert en selecteert. Een reportergen is een ander gen dat gebruikt wordt om getransformeerde cellen te onderscheiden en te kwantificeren of te detecteren hoe het ingevoegde gen binnen de gastheer functioneert. Het belangrijkste verschil tussen selecteerbare markering en reportergen is dat de selecteerbare marker gebruikt wordt om de niet-getransformeerde cellen te screenen en de getransformeerde cellen te signaleren terwijl reportergen wordt gebruikt om het niveau van de genexpressie in de gastheer te kwantificeren.

INHOUD

1. Overzicht en sleutelverschil

2. Wat is Selectable Marker

3. Wat is Reporter Gene

4. Side by Side Vergelijking - Selecteerbare Marker vs Reporter Gene

5. Samenvatting

Wat is een selecteerbare markering?

In genetische engineering wordt het gen van belang ingevoegd in een geschikte vector en getransformeerd in gastheerorganismen. De transformatie is echter alleen succesvol in de bevoegde gastheercellen, en er is een mogelijkheid dat gastheercellen de opname van vreemd DNA weigeren. Daarom is de differentiatie van de getransformeerde en niet getransformeerde cellen belangrijk om verder te gaan met experimenten. Daarom bevatten onderzoekers een selecteerbaar merkgen voor vector voor het gemakkelijk selecteren van de getransformeerde cellen van niet-getransformeerde cellen. Een selecteerbare marker is een DNA-sequentie, in het bijzonder een gen dat bruikbaar is bij identificatie van de getransformeerde cellen. Dit marker gen vertoont een eigenschap die een kunstmatige selectie van getransformeerde cellen past van niet-getransformeerde cellen op een medium.

Meest voorkomende selecteerbare markers gebruikt in moleculaire biologie zijn antibioticum resistente genen. Een antibioticum resistentie gen wordt in de vector ingebracht en in gastheercellen omgezet in het bijzonder aan de gastheerbacterie. Dat bepaalde antibioticum is opgenomen in het groeimedium van de bacterie. Door de aanwezigheid van de selectieve marker, onder de selectieve omstandigheden, kunnen alleen cellen die de juiste selecteerbare marker bevatten overleven.Niet-getransformeerde cellen kunnen niet groeien in het antibioticum bevattende medium. Daarom, door de selecteerbare marker die resistent is tegen antibiotica, worden de getransformeerde cellen gemakkelijk geïdentificeerd.

Genen die eigenschappen verlenen voor antimetabolieten, worden herbiciden gebruikt als selectieve markers bij het kloneren van vectoren in plantgenetische techniek. Deze cotransformatie van selectieve merkers in genetisch gemodificeerde organismen heeft echter negatieve effecten op het milieu en de mens. Het vrijkomen van antibiotica resistente bacteriën kan de antibiotische resistiviteit van menselijke pathogenen vergroten. Het kan het product of de biomassa door antibiotica verontreinigen en kan de selectieve druk verliezen als gevolg van antibiotische afbraak en inactivatie.

Figuur 01: Plasmidvector voor genoverdracht met selecteerbare marker

Wat is een Reporter Gene?

Reportergenen zijn genen die het detecteren of meten van de ingevoegde genuitdrukking mogelijk maken. Deze reportergenen kunnen worden gehecht aan regulatorische sequenties van het gen van belang om de expressie locatie of niveaus te signaleren. Daarom worden tijdens de expressie van genen onder dezelfde promotor getranscribeerd in een enkele mRNA-sequentie en dan vertaald in een eiwit dat het niveau van genuitdrukking kan aangeven.

Reportergenen zijn van verschillende typen en bevatten visueel herkenbare eigenschappen die gewoonlijk betrokken zijn bij fluorescerende en luminescerende eiwitten. Genen die fluorescerend eiwit en enzymen coderen, omzetten onzichtbare substraten naar luminescerende of gekleurde producten door de succesvolle genuitdrukking te signaleren en de kans te geven voor kwantificering van de genuitdrukking.

Figuur 02: Reporter Gene Expression

Wat is het verschil tussen Selectable Marker en Reporter Gene?

- diff Artikel Midden voor Tabel ->

Selecteerbare Marker vs Reporter Gene
Selecteerbare marker is een soort DNA-sequentie die helpt om getransformeerde cellen te onderscheiden met niet-getransformeerde cellen.	Reportergen is een gen dat helpt om de expressie van het gewenste gen in de gastheercel te kwantificeren.
Aard van de Units Geproduceerd
Genen worden gecodeerd met kenmerken die bijdragen tot kunstmatige selectie op groeiende media.	Genen zijn gecodeerd met visueel herkenbare eigenschappen.
Gebruik
Antibiotische resistentie genen, antimetabolieten genen, herbicide resistentie genen, enz. Zijn voorbeelden voor selecteerbare marker.	Genencode voor groen fluorescerend eiwit, P-glucuronidase, Chlooramfenicol acetyltransferase, Rood fluorescerend eiwit, enz. Zijn voorbeelden.

Samenvatting - Selecteerbare Marker vs Reporter Gene

Met selecteerbare markers kunnen getransformeerde cellen groeien in selectieve media gedoseerd met speciaal antibioticum of herbicide. Ze worden gebruikt voor vroege selectie van getransformeerde cellen. Reportergenen worden gebruikt om het niveau van expressie van het gewenste gen te kwantificeren. Zij laten ook de differentiatie van getransformeerde en niet getransformeerde cellen toe. Dit is het verschil tussen selecteerbare marker en reportergen.Zowel selecteerbare marker als reportergen worden beschouwd als belangrijke merkers in de genetische techniek.

Referenties:

1. Ziemienowicz, Alicja. "Plant selecteerbare markers en reportergenen. “SpringerLink. Springer-Verlag, n. d. Web. 23 maart 2017.

2. Shih, Chen-Han, Hsiao-Yin Chen, Hung-Chieh Lee en Huai-Jen Tsai. "Purple Chromoprotein Gene dient als een nieuwe selectiemarker voor transgenese van de Microalga Nannochloropsis oculata. "PLOOS EEN. Openbare Bibliotheek van Wetenschap, n. d. Web. 25 maart 2017

Image Courtesy:

1. "Plasmide with insert" Door Michael Jeltsch - Eigen werk (CC BY-SA 4. 0) via Commons Wikimedia

2. "Reporter gen" Door TransControl at en. wikipedia (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia