Verschil tussen Nitrocellulose en PVDF | Nitrocellulose vs PVDF
Belangrijkste verschil - Nitrocellulose versus PVDF
Western blotting is een methode die detectie en kwantificering van specifieke eiwitten uit een eiwitmonster mogelijk maakt. Betrouwbaarheid van de techniek hangt af van de keuze van een correct membraan voor absorptie van eiwitten uit de gel. Er zijn verschillende typen microporeuze membranen. Nitrocellulose- en PVDF-membranen zijn twee dergelijke membranen die de onderzoekers de voorkeur geven aan hun speciale eigenschappen over de andere typen membranen. De keuze tussen nitrocellulose of PVDF is ook een andere uitdaging bij western blotting. Zowel nitrocellulose als PVDF hebben een hoge eiwitabsorptiecapaciteit. Het belangrijkste verschil tussen nitrocellulose en PVDF membraan is dat nitrocellulosemembranen niet in staat zijn om antilichamen te verwijderen en het membraan te hergebruiken voor antilichamenherproberen, terwijl PVDF-membranen strippen en hergebruik van vermogen hebben .
INHOUD
1. Overzicht en sleutelverschil
2. Wat is nitrocellulose
3. Wat is PVDF
4. Side by Side Comparison - Nitrocellulose vs PVDF
5. Samenvatting
Wat is nitrocellulose?
Nitrocellulose is een polymeer vervaardigd door cellulose met salpeterzuur te behandelen en wordt gebruikt om microporeuze membranen in moleculaire biologie te maken, met name voor blotting technieken zoals zuidelijke, noordelijke en westelijke blotting. Pore maten van nitrocellulose membranen variëren van 3 tot 20 μm. Nitrocellulose microporeuze membranen vergemakkelijken de detectie van immunochemische reactie die op het oppervlak van het membraan gebeurt. Daarom worden nitrocellulose membranen vaak gebruikt voor immobilisatie van eiwitten en detectie van specifieke eiwitten in western blotting. Nitrocellulosemembranen kunnen ook glycoproteïnen en nucleïnezuren immobiliseren.
Nitrocellulosemembranen hebben de voorkeur in laterale stromingsbepalingen door verschillende kenmerken. Nitrocellulose membranen absorberen eiwitten bij een hoge concentratie. Het oplosmiddel dat gebruikt wordt om het membraan te nat maken, vermindert de absorptie van nitrocellulose membraan eiwit niet. Nitrocellulosemembranen kunnen gemakkelijk worden gesneden tot de gewenste gelgrootte en overdragen eiwitten van de gel naar het membraan door elektrische of capillaire overdracht. Nitrocellulose zorgt voor een snellere stroom van eiwitten door het membraan met een hoog bindend potentieel. Nitrocellulose toont een verbeterde sterkte van de behandeling. Een ander bijzonder kenmerk van nitrocellulose membraan is dat het gemakkelijk kan worden gelijmd met niet-oplosmiddel waterbestendige lijmen op verschillende plastic onderlagen.
Figuur 01: Nitrocellulosemembraan voor western blotting
Wat is PVDF?
Polyvinylideendifluoride (PVDF) is fluoropolymeer geproduceerd door polymerisatie van vinylideendifluoride en heeft een hoge immobilisatiecapaciteit van eiwitten. Daarom worden microporeuze membranen gemaakt van PVDF gebruikt in western blotting technieken om specifieke eiwitten te analyseren uit de mengsels van eiwitten. PVDF membranen kunnen ook worden gebruikt voor aminozuur analyse en eiwit sequencing. Het belangrijkste kenmerk van PVDF membraan over nitrocellulosemembraan is dat het gemakkelijk kan worden verwijderd van de antilichamen en hergebruikt voor latere antilichaamprobes.
PVDF membranen zijn dikker dan nitrocellulose membranen; dus meer bestand tegen schade tijdens hergebruik. PVDF membranen zijn zeer hydrofoob. Daarom moeten ze vóór gebruik in methanol of isopropanol worden geweekt.
Wat is het verschil tussen nitrocellulose en PVDF?
- diff Artikel Midden voor tafel ->
Nitrocellulose vs PVDF |
|
| Nitrocellulose is een polymeer samengesteld uit cellulose. | PVDF is een fluoropolymeer geproduceerd door de polymerisatie van vinylideendifluoride. |
| Membraanpore Maat | |
| Typische poriegroottes zijn 0. 1, 0. 2 of 0. 45μ | Typische poriëngroottes zijn 0. 1, 0. 2 of 0. 45μm |
| Proteïnebindende capaciteit Nitrocellulose heeft een eiwitbindende capaciteit van 80 tot 100 μg / cm | |
| 2 . PVDF heeft een eiwitbindende capaciteit van 170 tot 200 μg / cm | 2 . Gevoeligheid |
| Dit heeft een lage gevoeligheid in vergelijking met PVDF. | |
| Dit heeft een hoge gevoeligheid. | Detectie van laaguitdrukte proteïnen |
| Omdat de gevoeligheid laag is in nitrocellulosemembranen, is het niet geschikt voor detectie van laaguitgedrukte proteïnen. | |
| Dit is meer geschikt voor de detectie van laaguitgedrukte eiwitten vanwege de hoge gevoeligheid ervan. | Achtergrondgeluid |
| Dit heeft lager achtergrondgeluid | |
| Dit heeft een hoger achtergrondgeluid. | Interacties met eiwitten |
| Proteïne moleculen binden aan nitrocellulose membranen door hydrofobe interacties. | |
| Proteïnen binden aan PVDF membranen door hydrofobe en dipool interacties. | Aard van het membraan |
| Nitrocellulose is bros en breekbaar. Er zijn echter versies van nitrocellulose beschikbaar, en ze zijn bestand. | |
| PVDF is duurzamer en heeft een grotere chemische weerstand. | Vermogen om te stripen en opnieuw te gebruiken. |
| Nitrocellulose kan moeite hebben met strippen en reproberen zonder het signaal te verliezen. | |
| PVDF is ideaal voor toepassingen op het gebied van reprobing en sequencing. | Geschiktheid |
| Nitrocellulose is ideaal voor het detecteren van eiwitten met een laag molecuulgewicht. | |
| PVDF is meer geschikt voor het detecteren van eiwitten met een hoger molecuulgewicht. | Andere toepassingen |
| Nitrocellulose kan worden gebruikt voor nucleïnezuuranalyse en dot / slotting. | |
| PVDF kan worden gebruikt voor eiwitvolgorde en vaste fase assaysystemen. | Kosten |
| Dit is goedkoper dan PVDF membranen. | |
| Dit is duurder dan nitrocellulose membranen. | Behoefte aan voorverontreiniging |
| Nitrocellulosemembranen vereisen geen voorverpakkingen met methanol | |
| PVDF membranen vereisen vooraf met methanol. | Samenvatting - Nitrocellulose versus PVDF |
Nitrocellulosemembranen waren de eerste membranen die commercieel gebruikt werden voor laterale stromingsassays. Ze hebben een hoge capaciteit om eiwitten te absorberen. Daarom worden nitrocellulose membranen gebruikt in western blotting. PVDF is een ander type membraan dat wordt gebruikt in western blotting en heeft ook een hoge eiwitabsorptiecapaciteit. Beide typen worden gebruikt in western blotting voor eiwit analyse. PVDF membranen hebben echter meer speciale eigenschappen, waardoor ze meer geschikt zijn dan nitrocellulose membranen voor western blotting. Maar nitrocellulose membranen zijn meer geschikt voor het detecteren van laagmoleculaire gewogen eiwitten, PVDF membranen zijn meer geschikt voor het detecteren van hoogmoleculaire gewogen eiwitten. Dit is het verschil tussen nitrocellulose en PVDF membranen.
Image Courtesy:
1. "Western blot transfer" Door Bensaccount in Engels Wikipedia (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia
Referentie:
1. Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun en Thomas A. Neubert. "Gebruik van Nitrocellulose Membranen voor Protein Karakterisering door Matrix-Assisted Laser Desorptie / Ionisatie Massaspectrometrie. " Analytische scheikunde. U. S. National Library of Medicine, 15 juli 2006. Web. 28 maart 2017
2. "Moleculaire markers en plantbiotechnologie. " Google boeken. N. p., n. d. Web. 28 maart 2017
3. Maandag 8 april 2013 Tweet. "The Magic's In The Membrane: kies voor de beste resultaten voor de beste wis. "Biocompare. N. p., 08 april 2013. Web. 28 maart 2017
