Verschil tussen Cloning en Subcloning | Cloning vs Subcloning

Sleutelverschil - Cloning vs Subcloning

Klonen en subklonen zijn moleculaire biologische procedures die genetisch identieke cellen of organismen creëren die het DNA of gen dat van belang zijn, dragen. Klonen is een techniek die het inbrengen van het geïnteresseerde gen of DNA in een vector omvat, het repliceren daarvan binnen een gastheerbacterie, en de productie van cellen of organismen die exacte kopieën van de genetische make-up zijn. Subcloning is een techniek die de insertie van het gen van belang, dat al in een vector is ingevoegd, in een secundaire vector, replicatie ervan binnen een gastheerbacterie, en de productie van genetisch identieke kopieën van cellen of organismen omvat. Het belangrijkste verschil tussen klonen en subklonen is dat bij het klonen, het gen van belang, eenmaal geligeerd in een vector, doorgaan met het kloneringsproces, terwijl in het subkloneren het reeds gekloneerde gen van belang wordt gescheiden van de oudervector en opnieuw ingevoegd in een ontvanger vector en ga door met het proces .

INHOUD

1. Overzicht en sleutelverschil

2. Wat is Cloning

3. Wat is Subcloning

4. Vergelijking naast elkaar - Cloning vs Subcloning

5. Samenvatting

Wat is Cloning?

Klonen is de procedure die genetisch identieke organismen of cellen produceert. In de natuur gebeurt het klonen in de vorm van ongeslachtige voortplanting. Wanneer er geen genetische recombinatie of verandering is, ontvangen de dochtercellen dezelfde genetische make-up van de ouder. Prokaryotische en eukaryote organismen creëren klonen door binaire splitsing, ontluikende, mitose, enz. In moleculaire biologie is het klonen van genen of specifieke fragmenten van DNA een populaire methode om de structuur en functie van dat specifieke DNA-gedeelte te bestuderen.

Het hoofddoel van moleculaire kloning is om miljoenen exemplaren van genetisch identieke cellen of organismen te maken die het DNA-fragment van belang (vooral genen) dragen. Het creëert organismen met exacte genetische kopieën van een ander. Voornamelijk worden specifieke genen gekloneerd in moleculaire studies om structurele en functionele informatie te verkrijgen en voor DNA-sequencing. Ook voor de productie van specifieke eiwitten of producten op grote schaal wordt klonen veel gebruikt.

Kloneringsprocedure

De basis stappen van de kloningsprocedure zijn als volgt.

Identificatie en isolatie van het gen van belang. (Versterking van het gen van belang door PCR).
Beperkingsvertering van het gen van belang (restrictie-endonuclease snijdt het gen).
Beperkingsvertering van het vector DNA.(Vector DNA wordt ook gesneden onder gebruikmaking van hetzelfde restrictie-endonuclease).
Invoeging van het gen in de vector en vorming van het recombinante molecuul.
Transformatie van de recombinante vector in een gastheerbacterie.
Isolatie en identificatie van de getransformeerde bacteriën (plasmidevector moet een selecteerbaar gen bevatten, meestal een antibioticumresistentgen voor screen-getransformeerde bacteriën).
Recombinante genexpressie binnen de gastheer.

Figuur_01: Kloneringsprocedure

Wat is Subcloning?

Subcloning is een procedure voor het verplaatsen van een gen van belang van één vector naar een andere vector om de expressie van het gen te zien om de gewenste functionaliteit van het gen te verkrijgen. Bij deze methode zijn er twee vectoren betrokken; namelijk ouder vector en bestemmingsvector. Gekloonde inserts worden weer in een tweede vector in subkloning verplaatst. Het doel van het overbrengen van het gen van de eerste vector naar de tweede vector is het verkrijgen van iets dat niet kan worden gedaan door de eerste vector of om een gen weer in het reeds gekloneerde fragment van DNA te scheiden en het alleen uit te drukken. Beperkende enzymen worden in het begin bij deze procedure gebruikt.

Subkloneringsprocedure

De basis stappen van subkloning zijn als volgt.

Met behulp van restrictie-endonucleasen, scheiding van het DNA van belang in het donorplasmide (oudervector).
Amplificatie van het DNA van belang met behulp van PCR.
Reiniging van het PCR-product (DNA van belang) door gelelektroforese.
Opening van het ontvanger plasmide door dezelfde restrictie-endonucleasen gebruikt om DNA van belang in het ouderplasmide te scheiden.
Liggend van het DNA van belang (gen) in het ontvangerplasmide om het gesubkloneerde plasmide te creëren.
Transformatie van de subklonede vector in een bevoegde gastheerbacterie.
Screening van getransformeerde cellen.
Zuivering van het plasmide-DNA en gebruik voor DNA sequentiebepaling of expressie van de genen om de gewenste producten te verkrijgen.

Subklonen wordt uitgevoerd bij gelegenheden van het isoleren van één gen uit de gekloneerde groep genen of wanneer het gen van belang is vereist om over te dragen in een bruikbaar plasmide om de exacte functie van het gen van belang te zien.

Figuur_02: Subkloneringsprocedure

Wat is het verschil tussen Cloning en Subcloning?

- diff Artikel Midden vóór Tabel ->

Klonen vs Subkloning
Klonen is de procedure die genetisch identieke organismen of cellen produceert.	Subcloning is een procedure voor het verplaatsen van een gen van belang van één vector naar een andere vector om de expressie van het gen te zien om de gewenste functionaliteit van het gen te verkrijgen.
Proces
Het DNA van belang van het organisme scheiden en eenmaal in een vector ingevoegd worden en gekloneerd	Al gekloneerd DNA wordt gescheiden van de eerste vector en in een tweede vector ingevoegd en gekloond.
Beweging via vectoren invoegen
Verplaats geen inserts (DNA van belang) van één vector naar een andere vector.	Verplaats inserts van oudervector naar bestemmingsvector.

Samenvatting - Cloning vs Subcloning

Cloning creëert genetisch identieke cellen of organismen met het ingevoegde gen of DNA van belang.Het gaat door de scheiding en invoeging van het DNA van belang in een vector en expressie binnen een gastheerbacterie. Subkloning deelt soortgelijke stappen met klonen. In subkloning wordt echter al gekloneerd DNA-fragment (gen van belang) in een vector ingebracht en in een gastheerbacterie getransformeerd. Dat is het belangrijkste verschil tussen klonen en subkloning.

Referenties

Lodish, Harvey. "DNA-klonen met plasmide-vectoren. "Moleculaire celbiologie. 4e editie. U. S. National Library of Medicine, 01 jan. 1970. Web. 05 maart 2017
"Subcloning. "Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 februari 2017. Web. 06 maart 2017
"Subcloning. "Subcloning | Open Access artikelen | Open Access tijdschriften | Conferentie Proceedings | Redactie | Auteurs | Reviewers | wetenschappelijke gebeurtenissen. N. p., n. d. Web. 06 maart 2017
Wackerhage, Henning. "Hoe te subklonen. "Hoe te subklonen. N. p., 01 jan. 1970. Web. 06 maart 2017

Image Courtesy

Moleculaire Cloning Procedure - Door CNX OpenStax [CC BY 4. 0], via Wikimedia Commons
Subcloning Procedure - Door De oorspronkelijke uploader was Takometer in Engelse Wikipedia. wikipedia naar Commons.) [CC BY 2. 5], via Wikimedia Commons