Verschil tussen SDS Page en Western Blot | SDS Page vs Western Blot

Belangrijkste verschil - SDS Page vs Western Blot

Western blotting is een techniek die een specifiek proteïne van een eiwitmonster detecteert. Deze techniek wordt uitgevoerd via een aantal belangrijke stappen: gelelektroforese, blotting en hybridisatie. Natriumdodecylsulfaatpolyacrylamidegelelektroforese (SDS Page) is een soort gelelektroforese techniek die wordt gebruikt om eiwitten te scheiden volgens hun maten (molecuulgewichten). Western blot is een speciaal blad van een blottemembraan dat gebruikt wordt om hetzelfde patroon van de eiwitten in de SDS-pagina over te dragen. Het belangrijkste verschil tussen SDS Page en Western blot is dat SDS Page de afscheiding van eiwitten in een mengsel mogelijk maakt, terwijl western blot het detecteren en kwantificeren van een specifiek eiwit uit een mengsel toelaat. Beide zijn bruikbaar in eiwitanalyse studies.

INHOUD

1. Overzicht en sleutelverschil

2. Wat is SDS Page

3. Wat is Western Blot

4. Vergelijking naast elkaar - SDS Page vs Western Blot

5. Samenvatting

Wat is een SDS-pagina?

SDS Page is een gelelektroforese techniek die wordt gebruikt voor eiwitscheiding. Het wordt veelal gebruikt in biochemie, genetica, forensics en moleculaire biologie. Zodra de eiwitten uit het monster worden geëxtraheerd, worden ze uitgevoerd op een gel, bestaande uit SDS en polyacrylamide. SDS is een anionisch detergent dat gebruikt wordt om eiwitten te lineariseren (denaturatieproteïnen) en een negatieve lading te geven aan gelineariseerde eiwitten die evenredig zijn met hun moleculaire massa. Polyacrylamide wordt de vaste drager voor de gel. Gedenatureerde eiwitten die negatief geladen zijn, migreren naar het positieve einde van het apparaat door de gel. Volgens de grootte van de eiwitten verschillen migrerende snelheden tussen eiwitten en scheiding vindt plaats. Daarom is SDS-pagina nuttig voor het scheiden van afzonderlijke eiwitten op basis van hun maten.

De bereiding van de polyacrylamidegel voor de fractionering van eiwitten is een cruciale stap in SDS Page. De juiste concentratie van polyacrylamide en het type van het verknoopt middel heeft sterk invloed op de fysieke eigenschappen van de gel, waardoor de eigenlijke scheiding van de verschillende eiwitten wordt veroorzaakt. De poriëngroottes van de gel moeten goed worden beheerd voor effectieve scheiding. SDS Page wordt echter beschouwd als een high-resolution proteïne scheidingstechniek.

SDS Page techniek heeft een belangrijke beperking in eiwit analyse. Aangezien SDS de eiwitten vóór scheiding denatureert, staat het niet toe om enzymatische activiteit, eiwitbindende interacties, eiwitcofactoren enz. Te detecteren.

Figuur 01: SDS Pagina

Wat is Western Blot?

Western blotting techniek maakt het detecteren van een specifiek proteïne uit een eiwitmengsel en meting van de hoeveelheid en molecuulgewicht van het eiwit mogelijk. Western blot is het membraan dat tijdens de blottingprocedure wordt gebruikt om de spiegelbeeld van de eiwitpatronen in de SDS-polyacrylamidegel te krijgen. Het membraan dat wordt gebruikt voor western blotting bestaat voornamelijk uit nitrocellulose of polyvinylideendifluoride (PVDF). Het membraan met het overgedragen eiwit kan gebruikt worden om het gewenste eiwit te identificeren. Het vereist een hoge kwaliteit antilichaam voor de detectie van het gewenste eiwit door hybridisatie. Het antilichaam bindt aan zijn specifieke antigeen en onthult de aanwezigheid van het gewenste antigeen dat een eiwit is.

Overdracht van de eiwitten van de SDS polyacrylamidegel naar de western blot wordt uitgevoerd door elektroblotting. Het is een effectieve en snelle methode die ervoor zorgt dat de eiwitten uit de gel elektroforese worden en doorgeven op het nitrocellulosemembraan (western blot).

Figuur 02: Western Blot

Wat is het verschil tussen SDS Page en Western Blot?

- diff Artikel Midden voor tafel ->

SDS Pagina vs Western Blot

SDS Page is een gelelektroforese techniek.
Western blot is een techniek die op een membraan wordt uitgevoerd om een ​​specifiek eiwit uit een mengsel te detecteren.	Gebruik
SDS-pagina maakt het mogelijk om eiwitten te scheiden volgens hun maten.
Western blot maakt het mogelijk om eiwitten over te brengen op de SDS-pagina gel zonder het patroon te veranderen en hybridisatie mogelijk te maken met specifieke antilichamen.	Nadelen
Proteïne denaturatie, hoge kosten en aanwezigheid van neurotoxine chemicaliën zijn de nadelen van deze techniek.
Deze techniek is tijdrovend en vereist een goede ervaren persoonlijke en specifieke gecontroleerde omstandigheden.	Samenvatting - SDS Page vs Western Blot

SDS-pagina en western blot zijn twee methoden die betrokken zijn bij eiwitanalyse. SDS Page maakt het gemakkelijk mogelijk om eiwitten op een gel te scheiden volgens hun molecuulgewicht. Western blot helpt de aanwezigheid en hoeveelheid van een specifiek eiwit te bevestigen door hybridisatie met specifieke antilichamen. Dit is het verschil tussen SDS Page en Western blot.

Referenties:

1. Blancher, C. en A. Jones. "SDS-PAGE en Western Blotting Techniques. "Methoden in moleculaire geneeskunde. U. S. National Library of Medicine, n. d. Web. 27 maart 2017

2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, en David H. Petering. "Inheemse SDS-PAGE: Hoge resolutie elektroforetische scheiding van eiwitten met behoud van natuurlijke eigenschappen, inclusief gebonden metaalionen. "Metallomics: geïntegreerde biometale wetenschap. U. S. National Library of Medicine, mei 2014. Web. 27 maart 2017.

Image Courtesy:

1. "SDS-PAGE Electrophoresis" door Bensaccount in Engels Wikipedia (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

2. "Western blot 114A" Door Amanthabagdon - Eigen werk (Openbaar domein) via Commons Wikimedia